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核酸检测的原理是什么?

2021-01-30

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核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。以细胞为单位的生命体的遗传信息都是以脱氧核糖核酸的形式被储存在基因里的。

生活中大部分常见的致病性病毒的遗传物质是核糖核酸(RNA)。

核酸检测实质上就是对病毒的遗传物质RNA进行的检测。

目前常用的新冠状病毒的核酸检测方法为实时荧光RT-PCR核酸检测。其检测原理为:

1、提取样本中的RNA

RNA中可能来自新冠状病毒的RNA,也可能来自采样患者的组织和存在于采样部位的微生物的RNA。

2、逆转录

通过逆转录酶将样本的RNA逆转录为cDNA。因为新冠状病毒中的RNA极易降解,为了防止在检测过程中降解,我们把它转换为更稳定的DNA。

3、扩增cDNA

用PCR的方式,以cDNA为模版,用新冠状病毒的特异性的引物合成DNA,达到扩增cDNA的目的。这里特异性的引物设计出来只能与新冠状病毒核酸的序列相匹配结合来扩增出目的产物。所以只有采集的样本中含有新冠状病毒才能扩增出目的产物。

4、检测扩增出的PCR产物,即DNA片段

我们扩增的病毒DNA片段能够发出荧光而被仪器检测到。这些扩增出的供我们检测的产物的多少,很大程度上取决于样本中目标RNA量的多少。而目标RNA量的多少又与样本中病毒的多少相关。

现在的病毒核酸检测试剂盒,多数采用荧光定量PCR方法。检测原理就是以病毒独特的基因序列为检测靶标,通过PCR扩增,使我们选择的这段靶标DNA序列指数级增加,每一个扩增出来的DNA序列,都可与我们预先加入的一段荧光标记探针结合,产生荧光信号,扩增出来的靶基因越多,累积的荧光信号就越强。而没有病毒的样本中,由于没有靶基因扩增,因此就检测不到荧光信号增强。所以,核酸检测,其实就是通过检测荧光信号的累积来确定样本中是否有病毒核酸。