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深挖新葡萄8883官网NK无血清培养基——细胞功能检测第三弹

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2022-04-06

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上期文章我们展示了使用新葡萄8883官网纯因子无血清培养基培养出的NK细胞的脱颗粒能力,NK细胞脱颗粒能力可以用CD107a的表达来检测。实验结果表明,在不同的效靶比下,CD107a均能够正常表达。随着NK与K562细胞孵育时间的延长,CD107a的表达量有明显上调。

样本一:孵育2h

表格2.png

样本二:孵育4h

表格3.png

本期我们通过LDH法检测NK细胞的杀伤能力。细胞的胞浆内含有LDH,正常情况下LDH不能透过细胞膜,当细胞受到NK细胞的杀伤后,LDH释放到细胞外。LDH 可使乳酸锂脱氢,进而使NAD+还原成NADH,后者再经递氢体吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)还原碘硝基氯化四氮唑(INT),INT 接受H+被还原成紫红色甲月赞类化合物,在酶标仪上用490nm比色测定。其反应原理如下:

反应原理.png


检测步骤


1. 靶细胞K562的准备:实验前24h将靶细胞进行传代培养,应用前用无血清培养基清洗1次,用无血清培养基调整细胞密度并接种于孔板。

2. 效应细胞的准备:应用前用无血清培养基清洗1次,用无血清培养基调整细胞密度。

3. NK细胞活性检测:取靶细胞和效应细胞按不同效靶比进行接种,加入U型96孔培养板中,于37度,5%CO2培养箱中孵育4小时。随后将细胞在孔板中400g离心5min。LDH释放剂的添加为原体积的10%,加入释放剂后反复吹打细胞。

4. 分别取各孔上清液120ul,加入到新的96孔平底板种,每孔加入LDH检测工作液。

5. 混匀,室温25℃避光孵育30min。然后在490nm处测定吸光度。可使用600nm或大于600nm的任意波长作为参考波长进行双波长测定。


NK细胞活性(%)=[(反应孔OD-自然释放孔OD)/(最大释放孔OD-自然释放孔OD)]*100%


检测结果

未标题-1.jpg


检测结论

经LDH法检测可知,新葡萄8883官网纯因子无血清培养基培养出的NK细胞对K562细胞有正常的杀伤能力。